| Congresso Brasileiro de Microbiologia 2023 | Resumo: 1167-1 | ||||
Resumo:Os fosfolipídios são os principais e mais abundantes componentes estruturais da membrana plasmática de todas as células, e estão envolvidos em diversas atividades celulares incluindo sinalização celular e adaptação ao ambiente. O mais abundante dos fosfolipídios, fosfatidilcolina (FC), é sintetizado por duas vias biossintéticas diferentes, a via principal em fungos, CDP-DAG, sintetiza FC a partir da metilação da fosfatidiletanolamina (FE), enquanto a via alternativa Kennedy necessita de colina como precursor para biossíntese de FC. Para analisar a importância da FC na patobiologia do fungo Cryptococcus neoformans (Cn) foi realizada uma dupla deleção em dois genes: o gene opi3 e pct1, que codificam as enzimas sintetizadoras de FC na via principal e alternativa, respectivamente. Para construção do duplo mutante pct1 opi3, foi utilizado o mutante opi3 para realizar a transformação através da técnica de biolística, bombardeando o fungo com partículas em alta velocidade que possuíam os fragmentos do cassete de deleção, substituindo por recombinação homóloga o gene pct1. O cassete de deleção consiste em dois fragmentos de DNA, amplificados por PCR, que codificam o gene de resistência ao antibiótico higromicina. O mutante duplo pct1 opi3 foi submetido a testes fenotípicos de crescimento em diferentes condições de estresse e temperatura para avaliar a homeostase celular do Cn, e um dos principais fenótipos observados foi a redução do crescimento em meio mínimo (15 mM de glicose, 10mM de MgSO47⋅H2O, 29mM de KH2PO4, 13 de mM glicina e 3 μM de tiamina), indicando a incapacidade do mutante de sintetizar FC em níveis necessários ao crescimento celular em meio pobre em nutrientes. Entretanto, considerando a deleção do gene pct1, o duplo mutante deveria ser incapaz de utilizar colina para síntese de FC pela via Kennedy, o que torna curioso observar crescimento semelhante ao selvagem em meio YPD (1% Extrato de levedura, 2% peptona e 2% dextrose), rico em nutrientes, a 30°C e 37°C, revelando uma possível capacidade de adaptação do fungo à redução da FC na sua composição celular. Palavras-chave: Cryptococcus neoformans, deleção gênica, biossíntese de fosfatidilcolina, caracterização fenotípica Agência de fomento:Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) | |||||